一种基于双酶偶联高通量检测D-阿洛糖的新方法
无权-视为撤回

New method for detecting D-allose based on double-enzyme coupling high throughput

申请号：201410472672.2 申请日：2014-09-17

CN201410472672 CN104195219A 微信扫码查看/分享专利	摘要：本发明涉及一种基于双酶偶联反应的高通量检测D-阿洛糖的新方法。具体涉及利用吡喃糖氧化酶和过氧化物酶偶联，检测D-阿洛糖。该方法既可用于液体培养基中反应产物D-阿洛糖的检测，也可用于检测固体培养基中反应产物D-阿洛糖的生成。当用于液体培养基的检测时，反应产物与N-（2-羟基-3-磺丙基）-3，5-二甲氧基苯胺钠（HSDA）作用产生蓝色水溶性醌类物质，利用96孔酶标板在583nm处读取吸光值。吸光值与其浓度成线性关系，能够根据标准曲线计算浓度，并利用96孔酶标板进行高通量检测。当该方法用于固体培养基中D-阿洛糖的检测时，反应产物与二氨基联苯胺(DAB)作用生成不溶于水的褐色吩嗪聚合体，利用此显色反应可在培养皿中挑出阳性菌落。
	Abstract： The invention relates to a new method for detecting D-allose based on double-enzyme coupling high throughput, in particular to the new method for detecting the D-allose by coupling pyranose oxidase with peroxidase. The method can be used for detecting a reaction product, namely the D-allose in a liquid culture medium, and further can be used for detecting generation of the reaction product, namely the D-allose in a solid culture medium. When the method is used for detecting the liquid culture medium, the reaction product interacts with N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-3, 5-dimethoxyaniline sodium (HSDA) to generate blue water-soluble quinines, and a light absorption value is read at 583nm by using a No.96 hole enzyme label plate. The light absorption value is in a linear relationship with the concentration of the liquid culture medium, and the concentration can be calculated according to a standard curve, and the high throughput is detected by using the No.96 hole enzyme label plate. When the method is used for detecting the D-allose in the solid culture medium, the reaction product interacts with diaminobenzidine (DAB) to generate a water-insoluble brown phenazine polymer, and positive bacterial colonies in a culture dish can be picked out by using a chromogenic reaction.
	申请人：中国科学院天津工业生物技术研究所
	Applicant： TIANJIN INST IND BIOTECHNOLOGY CAS
	地址： 300308 天津市滨海新区空港********(隐藏)
	发明(设计)人：柏玮朱玥明李星硕门燕孙媛霞
	Inventor： BAI WEI; ZHU YUEMING; LI XINGSHUO; MEN YAN; SUN YUANXIA
	主分类号： C12Q1/28(2006.01)I
	分类号： C12Q1/28(2006.01)I C12Q1/26(2006.01)I

法律状态

2017-07-14	发明专利申请公布后的视为撤回 IPC(主分类):C12Q 1/28申请公布日:20141210

2015-07-15	实质审查的生效IPC(主分类):C12Q 1/28申请日:20140917

2014-12-10	公开

注：本法律状态信息仅供参考，即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。

其他信息

主权项

一种利用吡喃糖氧化酶和过氧化物酶偶联反应的检测D?阿洛糖的高通量筛选新方法，当用于液体培养基时，步骤如下：（1）将单菌落或纯化后的酶转入含转化底物的96深孔培养板中；（2）将96深孔培养板利用冷冻离心机在合适的条件下离心，取其上清液进行测定；（3）利用双酶偶联的方法，在96孔板板中结合试剂A测定上述上清液中D?阿洛糖的含量。

公开号

104195219A

公开日

2014-12-10

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代理人

颁证日

优先权

国别	优先权号	优先权日	类型

CN	201410472672	20140917	Y

国际申请

国际公布

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专利对比文献

类型	阶段	文献号	公开日期	涉及权利要求项	相关页数

A	SEA	CN101071105A	20071114	1-9	全文

Y	SEA	CN101641334A	20100203	4	权利要求7

Y	SEA	CN102175670A	20110907	4	权利要求1-4

X	SEA	CN102175670A	20110907	1-3，5-9

注：不保证该信息的有效性、完整性、准确性，以上信息也不具有任何效力，仅供参考。使用前请另行委托专业机构进一步查核，使用该信息的一切后果由用户自行负责。

Ｘ：单独影响权利要求的新颖性或创造性的文件；
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Ａ：背景技术文件，即反映权利要求的部分技术特征或者有关的现有技术的文件；
Ｒ：任何单位或个人在申请日向专利局提交的、属于同样的发明创造的专利或专利申请文件；
Ｐ：中间文件，其公开日在申请的申请日与所要求的优先权日之间的文件，或会导致需核实该申请优先权的文件；
Ｅ：单独影响权利要求新颖性的抵触申请文件。

期刊对比文献

类型	阶段	期刊文摘名称	作者	标题	涉及权利要求项	相关页数

A	SEA	《APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》	CHRISTIAN LEITNER等	Purification and Characterization of Pyranose Oxidase from the White Rot Fungus Trametes multicolor	1-9	3636-3644

CHRISTIAN LEITNER等: "Purification and Characterization of Pyranose Oxidase from the White Rot Fungus Trametes multicolor", 《APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY》